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    酶聯(lián)免疫吸附劑測定實(shí)驗基本原理：
    1.使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性。
    2.使抗原或抗體與某種酶連接成酶標抗原或抗體，這種酶標抗原 或抗體既保留其免疫活性，又保留酶的活性。
    3.在測定時(shí)，把受檢標本(測定其中的抗體或抗原)和酶標抗原或 抗體按不同的步驟與固相載體表面的抗原或抗體起反應。用洗滌的方 法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與其他物質(zhì)分開(kāi)，后結合在 固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。
    4.加入酶反應的底物后，底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物，產(chǎn)物的量 與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據顏色反應的深淺刊物定性 或定量分析。
    由于酶的催化頻率很高，故可極大地地放大反應效果，從而使測 定方法達到很高的敏感度。 
        
酶聯(lián)免疫DIY夾心法實(shí)驗技術(shù)指南：
1.選擇抗體時(shí)選擇一個(gè)單抗和一個(gè)多抗進(jìn)行配對；若選擇兩個(gè)單 抗，必須識別不同表位的抗體；從同一家公司選擇抗體對。
2.為了確定*信號和低背景應將捕獲抗體(0.5-4μg/ml)和檢測抗 體(0.25-2μg/ml)在預實(shí)驗中進(jìn)行彼此相抗的滴定。同時(shí)，應包括在 適當范圍內的標準品的系列稀釋。按試劑說(shuō)明書(shū)常規提供的范圍進(jìn)行 操作。
3.標準品的配制：對于每種細胞因子應仔細閱讀說(shuō)明書(shū)，注意每批的 細節。在使用細胞因子前，瞬時(shí)離心試劑瓶，盡可能多地收回其中的 細胞因子。根據每批說(shuō)明書(shū)中的細節，將凍干的細胞因子復溶。
4.一般待測抗原標準曲線(xiàn)的線(xiàn)性范圍的可通過(guò)將標準品做8次2倍系列 稀釋從2000pg/ml 到15pg/ml?？衫脴藴实腅LISA操作流程、放大試 劑盒、第三類(lèi)試劑、或改變酶底物系統可在一定范圍內提高靈敏度。
5.為了優(yōu)化靈敏度，建議過(guò)夜孵育標準品和標本。
6.若使用過(guò)氧化物酶作為顯色系統，應嚴禁在洗液和稀釋液中加疊氮 鈉，疊氮鈉可抑制過(guò)氧化物酶的活性。
7.當測定混合液體中的抗原時(shí)，如血清，建議在標本稀釋液中加不相 干的Ig.

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