自身免疫試劑盒原理:
當細胞在非變性條件下被裂解時(shí),完整細胞內存在的許多蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)間的相互作用被保留了下來(lái)。如果用蛋白質(zhì)x的抗體免疫沉淀x,那么與x在體內結合的蛋白質(zhì)y也能沉淀下來(lái)。這種方法常用于測定兩種目標蛋白質(zhì)是否在體內結合;也可用于確定一種特定蛋白質(zhì)的新的作用搭檔。
自身免疫試劑盒注意的問(wèn)題:
(1)細胞裂解采用溫和的裂解條件,不能破壞細胞內存在的所有蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用,多采用非離子變性劑(NP40或Triton X-100)。每種細胞的裂解條件是不一樣的,通過(guò)經(jīng)驗確定。不能用高濃度的變性劑(0.2%SDS),細胞裂解液中要加各種酶抑制劑。
(2)使用明確的抗體,可以將幾種抗體共同使用。
(3)使用對照抗體:
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